Серологическая диагностика туляремии

Серологическая диагностика туляремии

Туляремия – природноочаговая зоонозная инфекция, широко распространенная на территории России в пределах умеренного климатического пояса Северного полушария. Природные очаги туляремии распространены в различных климатических зонах и приурочены к разнообразным ландшафтам.

Возбудитель туляремии – мелкая коккобактерия, является одним из наиболее инфекциозных микроорганизмов и обладает высокой патогенностью для человека.

Возбудитель туляремии характеризуется высокой устойчивостью в окружающей среде, особенно при низких температурах и высокой влажности (выживает при -30С, сохраняется во льду до 10 месяцев, в мороженом мясе – до 3-х месяцев), менее чувствителен к высыханию – в шкурках павших от туляремии грызунов сохраняется до 1,5 месяцев при комнатной температуре и до 1 недели при температуре 30С. Возбудитель остается жизнеспособным в речной воде – до 9 месяцев, в почве – до 2,5-4х месяцев; на зерне и соломе – от 3-х недель до 6 месяцев в зависимости от температуры окружающей среды. Длительно сохраняется в молоке, сливках при низких температурах. Малоустойчив к высоким температурам, солнечному свету, УФО – лучам, дезинфицирующим средствам.

Резервуаром и источником инфекции при туляремии являются различные виды диких и синантропных грызунов (ондатры, зайцы, водяные крысы, полевки, хомяки, мыши и др.), а также домашние животные – свиньи, овцы, крупный рогатый скот. Среди животных болезнь распространяется в основном через кровососущих насекомых. От человека к человеку туляремия не передается.

Для туляремии характерно множественность механизмов заражения и путей передачи возбудителя инфекции: трансмиссивный механизм заражения человека осуществляется в результате укусов инфицированными кровососущими членистоногими (комары, слепни, клещи, оводы); контактный – через поврежденные и неповрежденные кожные и слизистые покровы при соприкосновении с больными или павшими грызунами и зайцами; алиментарный – при употреблении продуктов питания, сельскохозяйственных продуктов и воды (колодезной, горных ручьев и других открытых водоемов), контаминированных возбудителями туляремии от больных грызунов; аспирационный – при вдыхании воздушно-пылевого аэрозоля, образующегося при переработке зерна, перекладке сена, соломы, контаминированных возбудителем туляремии от больных грызунов.

Восприимчивость к туляремии очень высокая. Болезнь чаще регистрируется в виде спорадических случаев, сезонный подъем заболеваемости отмечается в летнее-осенний период года. После перенесенного заболевания формируется стойкий иммунитет.

Возбудитель туляремии может проникать в организм различными путями, что обуславливает многообразие клинических проявлений. Инкубационный период составляет от нескольких часов до 20 дней (в среднем – 3-7 дней). По локализации первичных поражений различают следующие клинические формы туляремии: язвенно-бубонную, бубонную, глазно-бубонную, легочную, абдоминальную, генерализованную, другие формы туляремии – ангинозно-бубонная.

Заболевание начинается остро с внезапного подъема температуры до 38,5-40С. Появляется резкая головная боль, головокружение, боль в мышцах ног, спины и поясничной области, потеря аппетита, расстройства сна. На месте внедрения инфекции часто оказываются первичный аффект — инфильтрат, язвы, нагноения. Лихорадка является длительной, характерный признак — увеличение лимфатических узлов, размеры которых могут быть от горошины до грецкого ореха. Часто появляется сыпь полиморфного характера в первые 2-3 недели болезни и, как правило, на симметричных участках тела – в виде перчаток, носков, воротника, маски. В случае развития генерализованной формы заболевания чаще возникают туляремийные пневмонии вторичного типа, нередко образуется шок инфекционно-токсического характера. Возможно возникновение менингитов, миокардитов, менингоэнцефалитов, полиартритов и др.

При появлении симптомов заболевания необходимо обратиться к врачу. Лечение больного проводится в условиях стационара, основным методом лечения больных туляремией является антибиотикотерапия. Прогноз благоприятный. Летальный исход возможен в 0,5% случаев при генерализованной и легочной формах.

Для лабораторной диагностики туляремии используются: серологический, бактериологический, биологический, молекулярно-генетический методы исследования; специфическая и быстрая диагностика производится с применением кожно-аллергической пробы, которая становится положительной уже к 3-5 дню заболевания.

В целях профилактики заболевания туляремией необходимо соблюдать правила личной гигиены – тщательно мыть руки перед приемом пищи, хранить продукты питания и воду в недоступных для грызунов местах. Не рекомендуется пить воду из неизвестных источников, при проведении сельскохозяйственных работ и работ на загородных дачных участках необходимо использовать средства индивидуальной защиты – маски, перчатки, защитную рабочую одежду и др. Необходимо применять средства защиты от укусов клещей и других насекомых – репелленты и защитную одежду. Трупы грызунов нужно сжигать, нельзя прикасаться к ним незащищенными руками.

Самым эффективным методом профилактики туляремии является иммунизация (вакцинация). Вакцинацию проводят населению, проживающему на неблагополучных по туляремии территориях, а также контингентам «риска» (полевые и лесные работы, обработка меха, лабораторная работа с животными, сотрудники дезстанций). Иммунизация против туляремии проводится в соответствии с национальным календарем профилактических прививок.

Читайте также:  Нейтрофилы при вич

Ежегодное проведение дератизационных мероприятий – надежное средство профилактики туляремии.

Если вы нашли ошибку: выделите текст и нажмите Ctrl+Enter

Лабораторная диагностика туляремии

Спорадическая заболеваемость туляремией, полиморфизм клинических проявлений вызывают определенные трудности постановки диагноза. Всегда необходимо помнить, что трудность распознавания туляремии по клиническим признакам обусловливает необходимость комплексной диагностики с учетом данных эпидемиологического анализа (анамнеза), клинических признаков и лабораторного исследования.

Для целей лабораторной диагностики туляремии у людей используют серологические реакции (реакция агглютинации, РПГА, РНГА, реакция иммунофлюоресценции) и кожно – аллергическую пробу.

Наиболее широко распространена реакция агглютинации. Она считается положительной при получении агглютината со специфическим антигеном в разведении сыворотки 1:100 и выше. Агглютинины выявляются со 2-й недели болезни. Нарастание титров в динамике подтверждает диагноз. Более чувствительна реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) или реакция непрямой гемагглютинации (РНГА). В качестве антигена применяют (для серологических реакций) туляремийный диагностикум (убитая формалином взвесь туляремийных бактерий). К ускоренным методам ориентировочной серологической диагностики туляремии относится кровяно – капельная реакция агглютинации. На предметное стекло наносят толстую каплю крови больного, каплю дистиллированной воды для лизиса эритроцитов (облегчает чтение реакции) и каплю диагностикума. Агглютинация наступает немедленно при наличии в крови больного агглютининов (антител) в диагностическом титре 1:100 и выше. Однако она не отражает динамики нарастания титра антител и не является ранним методом диагностики.

Внутрикожная аллергическая проба на введение аллергена – тулярина – относится к высокочувствительным и высокоспецифичным и ранним тестам: положительный ответ ее можно получить уже на 3 – 5 день болезни. Тулярин вводят внутрикожно по 0,1 мл. в среднюю треть плеча с ладонной стороны. Учет реакции производят через 24-48 часов, считая ее положительной при наличии инфильтрата, болезненности и гиперемии диаметром от 0,5 см. и более. Только одна гиперемия, исчезающая через сутки, расценивается как отрицательный результат.

Бактериологический метод (посев исследуемого материала на селективные питательные среды (желточную среду Мак-кое) не всегда эффективен.

Самый надежный способ обнаружения туляремийного микроба в любом исследуемом материале – биологический метод исследования: постановка биопроб (заражение исследуемым материалом биопробных животных – белых мышей, которые погибают от туляремии обычно на 3-4 реже на 6-10 сутки). В последнее время при обследовании очагов широко и успешно используют серологическую реакцию РНГА. Этим методом исследуют погадки хищных птиц, помет грызунов и другие объекты внешней среды для поиска туляремийного антигена в них для принятия адекватных мер по профилактике заболеваний людей туляремией.

ПРОФИЛАКТИКА

Предупреждение туляремии складывается из двух главных направлений: контроля за природными очагами и вакцинопрофилактики людей. Контроль в природных очагах проводят путем систематического наблюдения за численностью грызунов и их инфицированностью, выявление инфицированных переносчиков; эпидемиологической разведки новых территорий, исследования воды открытых и временных водоемов, зерна и других объектов внешней среды, составление прогнозов эпизоотологической и эпидемиологической ситуаций. Подавление природных очагов включает уничтожение грызунов и переносчиков, запашку, осушение территории действующего очага или создание водоемов. Практика показала, что ликвидация природного очага достигается трудно, и в большинстве случаев они существуют длительно.

Важной и эффективной мерой профилактики является вакцинация людей. В соответствии с действующими правилами (приказ МЗ СССР № 133 от ) прививкам подлежат люди, проживающие на территории, энзоотичной по туляремии, а также выезжающие на сезонные работы или отдых в такие места. Для прививки используют вакцину из живых туляремийных микробов. Ее прививают накожно, однократно. На 5-7 и 12-15 день проверяют прививаемость. В случае отрицательного результата проводят повторную прививку. вакцинация обеспечивает иммунитет, который сохраняется до 5 лет, а вотдельных случаях до 10-15 лет.

Состояние иммунитета среди населения контролируют через 1-2 года путем выборочного обследования взрослого населения. Для этой цели используют накожную аллергическую пробу с тулярином, а в некоторых случаях – серологические реакции (РА и РНГА). иммунная прослойка должна составлять около 90%.

В настоящее время плановую вакцинопрофилактику проводят не на всей территории природного очага, а в пределах энзоотичного района и прилегающих к нему сходных ландшафтов.

Большое внимание следует уделять санитарно – просветительной работе среди профессиональных групп, контактирующих с грызунами. В очаге запрещается пользоваться сырой водой из открытых водоемов, проводят меры защиты продуктов и водоисточников от мышевидных грызунов. Охотникам рекомендуют при снятии шкурок с убитых грызунов пользоваться перчатками. В случаях эпизоотии среди грызунов сельскохозяйственным рабочим рекомендуют ношение очков – консервов и масок при скирдовании сена, соломы, обмолоте хлеба и т.д

Читайте также:  Методы психологического давления на человека

а) Наиболее распространенным и вместе с тем вполне точным методом серологической диагностики туляремии является реакция агглютинации (РА). Она служит для установления диагноза у больного или переболевшего (ретроспективный диагноз) и может быть использована при изучении иммунологического состояния привитых против туляремии. Обнаружение агглютининов у больного туляремией обычно отмечается через 10-15 дней, при этом агглютинационный титр сыворотки в этот период составляет 1:50-1:100, но далее быстро нарастает и на 4-6-й неделе болезни достигает 1:400-1:800, реже 1:1600 и выше.

По достижении максимальных показателей агглютинационный титр сыворотки затем медленно снижается и через 6-12 месяцев составляет 1:100-1:400, а позднее падает до 1:10-1:50 и на этом уровне может удерживаться в течение многих лет. Длительность сохранения агглютининов делает возможным использование РА для ретроспективного диагноза.

У привитых против туляремии агглютинины обнаруживаются через 2-3 нед., достигают через 4-6 нед. максимальных титров 1:160-1:320, реже выше, затем снижаются до 1:10-1:40 и обычно выявляются в течение 5-7 лет после вакцинации.

Антигеном для РА служит туляремийный диагностикум, представляющий собой убитую формалином взвесь туляремийных бактерий вакцинного штамма. В 1 мл препарата содержится 25 млрд, туляремийных бактерий. Для постановки РА туляремийный диагностикум предварительно разводят 0,9%-ным раствором хлорида натрия (pH 7,0-7,2) в 5 раз до концентрации 5 млрд, туляремийных бактерий в 1 мл.

Учет результатов РА производят через 18-24 ч невооруженным глазом. Оценку реакции осуществляют на основании степени прозрачности надосадочной жидкости в пробирках, количества и характера осадка микробной массы (агглютината).

Агглютинационный титр сыворотки учитывают по последнему разведению, которое дало вполне четкую реакцию (не менее трех плюсов).

При серологической диагностике туляремии у человека диагностическим считается титр 1:100 и выше, однако обязательно должно быть прослежено его нарастание. При отрицательной или сомнительной реакции, а также при положительной реакции в низких разведениях сыворотки у подозрительных на туляремию больных рекомендуют повторить исследование сыворотки через 7-10 дней. Нарастание титра сыворотки в 2-4 раза и выше свидетельствует о свежем случае туляремии и подтверждает диагноз.

Реакцию агглютинации можно ставить в микрообъемах, используя для этого сыворотку или плазму крови, взятую из пальца руки. Диагностикум для реакции микроагглютинации готовят из убитой культуры вакцинного штамма туляремийного микроба, которую окрашивают гематоксилином. Реакцию микроагглютинации ставят в полистироловых пластинах микротитратора Такачи. Для этого в ряд лунок полистироловой пластины микротитратора Такачи вносят 50 мкл физиологического раствора (pH 7,0-7,2).

Затем при помощи титратора с головкой объемом 50 мкл раститровывают исследуемую сыворотку, предварительно разведенную 1:5 (или неразведенную плазму крови) и добавляют в каждую лунку равный объем (50 мкл) цветного, окрашенного гематоксилином диагностикума. При этом происходит разведение сыворотки в 4 раза (с 1:5 до 1:20), и получают следующий ряд разведений сыворотки 1:20, 1:40, 1:80, 1:160 и т.д. Пластины тщательно встряхивают и помещают на 2 ч в термостат при температуре 37°С, затем выдерживают 12-18 ч при комнатной температуре. В лунках с положительным результатом антиген выпадает на дно в виде «зонтика» (агглютинат), а в случае отрицательного результата — в виде «пуговки».

Титры реакции микроаттлютинации, как правило, совпадают или на одно разведение ниже титров РА, выполненной макрометодом.

б) Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) является чувствительным методом серологической диагностики и используется как для ранней, так и ретроспективной диагностики, а также для определения иммунологического состояния привитых. У больных туляремией гемагглютинины обычно обнаруживаются в конце первой или на второй неделе заболевания. Через 1—1,5 мес. титры РНГА достигают максимальных показателей (1:10 000-1:20 000, реже выше), после чего снижаются и на уровне 1:100-1:200 сохраняются длительное время.

У привитых антитела также обнаруживаются постоянно, однако, в более низких титрах, не превышающих 1:2000-1:5000 через 1-1,5 мес. после вакцинации, и сохраняются в течение нескольких лет на низком уровне 1:20-1:80. Обычно гемагглютинационный титр сыворотки превышает таковой агглютинационный. Особенно это выражено у больных в острый период болезни или у привитых в короткие сроки после вакцинации. При ретроспективном обследовании переболевших и привитых в отдаленные сроки резких различий в титрах РА и РИГА не отмечается.

Антигеном для постановки РИГА служит туляремийный эритроцитарный диагностикум (антигенный). Препарат представляет собой формал и визированные эритроциты барана, сенсибилизированные туляремийным антигеном; выпускается в жидком и сухом виде. Жидкий препарат — 10% взвесь эритроцитов в 10%-ном растворе формалина. Сухой лиофилизированный препарат — высушенная в вакууме 10% взвесь эритроцитов без консерванта. Перед употреблением его разводят в соответствии с указаниями на этикетке. Для постановки реакции в полистироловых пластинах оба препарата применяют в 2,5%-ной концентрации, а при постановке реакции в микрообъемах — в 0,5%-ной концентрации. Гемагглютинационный титр сыворотки учитывают по последнему ее разведению, которое дало вполне четкую реакцию (не менее трех плюсов).

Читайте также:  Когда кашляю болит грудная клетка температуры нет

Диагностическим титром считается разведение 1:100 и выше, однако, так же как и в случае РА, необходимо проследить за его нарастанием.

РНГА при туляремии является достаточно специфичной и обнаруживает некоторые перекрестные реакции только с бруцеллезными сыворотками. Дифференциальная диагностика возможна по высоте титров в РНГА, которые значительно выше с гомологичным антигеном.

РНГА может быть выполнена в микрообъемах при помощи микротитратора типа Такачи, который позволяет осуществлять титрование материала в объемах 25 и 50 мкл. Техника постановки реакций, последовательность всех операций такая же, как и при исследовании в полистироловых пластинах. Следует, однако, иметь ввиду, что чувствительность микрометода обычно на одно разведение (т.е. в 2 раза) ниже, чем макрометода.

Специфичность положительного результата, полученного в РНГА, может быть проверена при помощи трехкомпонентной реакции — реакции торможения пассивной гемагглютинации (РТНГА). Эту реакцию ставят для подтверждения специфичности положительного результата РНГА, когда он вызывает сомнение или представляет особый эпидемиологический интерес. Механизм реакции заключается в специфическом торможении гемагглютинации при добавлении к испытуемой сыворотке взвеси убитых туляремийных бактерий. В реакции взаимодействуют три компонента: испытуемая сыворотка, специфический туляремийный антиген и антигенный эритроцитарный диагностикум.

в) Иммуноферментный анализ на твердом носителе используют для диагностики туляремии у больных и переболевших людей, определения наличия иммунитета у вакцинированных против туляремии. У больных туляремией специфические антитела обнаруживаются в И ФА в промежутке между 6-10-м днями, достигают максимальных показателей к 4-7-й неделе, затем уровень их снижается, но они продолжают выявляться длительное время (более 10 лет после переболевания). ИФА обеспечивает более раннюю (по сравнению с РА и РИГА) и эффективную иммунологическую диагностику. Титры антител у больных и вакцинированных колеблются в значительных пределах от 1:400 до 1:40 000 и выше и, как правило, в 10-20 раз превышают таковые в РА и РНГА.

Для постановки ИФА используют диагностическую тест-систему иммуноферментную для определения туляремийных антител. Выявление туляремийных антител в сыворотках людей происходит за счет специфического взаимодействия антигена возбудителя туляремии, адсорбированного на планшете, с туляремийными антителами в исследуемой сыворотке. Образовавшийся комплекс антиген — антитело определяют при помощи антител против иммуноглобулинов человека, меченных иероксидазой.

В соответствии с назначением тест-система представляет собой набор ингредиентов для проведения иммуноферментного анализа на твердофазном носителе и включает в себя: туляремийный липонолисахарид; антитела против иммуноглобулинов человека, меченных иероксидазой; контрольную положительную сыворотку; контрольную отрицательную сыворотку; набор солей, необходимых для приготовления буферных растворов; субстрат — О-фенилендиамин (ОФД); твин-20; бычий сывороточный альбумин (БСА); планшеты для ИФА однократного применения.

Сыворотки рекомендуется первоначально исследовать параллельно в двух лунках в разведении 1:200 с последующей раститровкой положительных, сывороток, для определения титра антител, используя двукратные разведения. Диагностическим титром в ИФА считают разведение сыворотки 1:400 и выше.

В последние годы для диагностики туляремии разработаны и некоторые другие методы, в частности основанные на использовании синтетических носителей для сенсибилизации антигена, с успехом используемые в отдельных регионах и учреждениях.

г) Непрямой иммунофлуоресцентный метод. Для обнаружения туляремийных антител готовят мазки из 1-2-суточной агаровой культуры возбудителя (взвесь 1 млрд клеток/мл). При этом на одном предметном стекле делают 8 мазков, фиксируют их в этиловом спирте в течение 30 мин, не обжигая высушивают на воздухе и помещают во влажную камеру. Исследуемую сыворотку разводят двукратно до разведений от 1:10 до 1:640-1:1280 и наносят пастеровской пипеткой на мазки, начиная с большего разведения. Влажную камеру с препаратом помещают в термостат при 37°С на 30 мин. Мазок отмывают от несвязавшихся антител и после подсыхания его вновь помещают во влажную камеру, докрашивая антивидовой люминесцирующей сывороткой в рабочем разведении. После просмотра препарата устанавливают титр антител в исследуемой сыворотке.

Контролем служат препараты, в которых туляремийные бактерии обработаны туляремийной сывороткой (положительный контроль) и сывороткой, не содержащей антитела к возбудителю туляремии (отрицательный контроль). При исследовании сыворотки больного с подозрением на туляремию диагностическим считается титр не менее 1:40.

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 30.1.2020

Ссылка на основную публикацию
Сердце болит долгое время
О чем свидетельствуют разные виды боли в сердце и на что нужно обращать внимание, пишет сайт "Сегодня" редактор раздела Fun...
Семя льна при панкреатите как принимать
Семя льна человек употребляет издавна. Много лет назад люди употребляли его в пищу во многих странах. В России льняное семя...
Семявыводящий проток воспаление симптомы
Инфекции в малом тазу провоцируют множество тяжелых воспалительных процессов. Один из них – фуникулит, или воспаление семенного канатика. Заболевание редко...
Сердце болит и быстро бьется
Быстрое дыхание, проблемы с пульсом. На это стоит обратить внимание и пройти обследование. Наши сердца бьются 100 000 раз в...
Adblock detector